基因突变文库合成
基因突变文库是大量DNA变体序列的组合,是基因合成、基因突变和定向进化研究相结合的产物。通用生物提供的基因突变文库服务,可根据您的要求仅突变指定的氨基酸或核苷酸序列,同时保证文库的容量、多样性和完整性,可用于蛋白抗体文库的构建与筛选。

可提供突变引物库种类:


Trimer简并引物

使用单一核苷(monomer)合成的简并引物,在突变位点会不可避免的产生冗余突变和终止密码子。将三个核苷按固定顺序连接起来所形成的三联核苷(Trimer Phosphoramidites)可以对应单一的氨基酸。以Trimer混合物作为元件设计的简并引物,能够保证突变位点的氨基酸按照设计的比例构成,满足特定位点的氨基酸多样性和偏好性。

Trimer与氨基酸对照表

Amino Acid
Abbreviaiom
Lys
K
Asn
N
Thr
T
Ile
I
Met
M
Gln
Q
His
H
Pro
P
Arg
R
Leu
L
Glu
E
Asp
D
Ala
A
Gly
G
Val
V
Tyr
Y
Swr
S
Cys
C
Trp
W
Phe
F

示例:

5GCAACTTATTACTGTCAGCAA(X)5-8CYGWTCACGTTCGGACAGGG3

X Trimers=Y(50%)/S (10)/G(10)/A(5)/F(5)/W(5)/H(5)/P(5)/V(5)


IUBcode简并引物

通过混合2-4种碱基,核苷代码由单一的ATCG拓展到RY......N11种混合核苷代码(IUB code)。使用IUB code构建不同的密码子组合,可以在突变位点形成固定氨基酸的组合。

IUBcode密码对照表

IUBcode
Mixed Bases
R
A、G
Y
C、T
M
A、C
K
G、T
S
C、G
W
A、T
H
A、C、T
B
C、G、T
V
A、C、G
D
A、G、T
N
A、C、G、T


 

NNK简并引物

NNK简并密码子包含了32种密码子组合,覆盖了所有20种氨基酸残基,是构建文库常用的简并密码子。

示例

5GGCCCTAACGGATAACCG(NNK)6GCCAATTCATGCACCTTACG3

N=A/C/G/T, K =G/T


服务优势
    1. 1、无需DNA模板,只需提供序列信息
    2. 2、超高的突变精确性、更丰富的文库多样性
    3. 3、更大的文库容量,更高的筛选成功率
    4. 4、获得利用传统突变方法无法获得的基因变异体
服务说明
    质量控制:
    1、线性DNA文库:PCR产物文库,将该文库连接至特异性载体上,随机挑取12-96个克隆测序,从而确定该文库的多样性和准确率
    2、质粒DNA文库:将线性DNA文库装至客户指定载体上所得到的克隆文库,随机挑取12-96个克隆进行测序,从而确定该文库的多样性和准确率
服务流程
    文库设计---突变引物库合成----质粒DNA文库构建(或线性DNA文库构建)----质量控制----交付质粒DNA文库或线性DNA文库。
服务订购
1、1-2μg线性DNA文库或5-10μg质粒DNA文库的冻干样品
2、发送文件,包括原始测序谱图、QC文件(线性DNA文库或质粒DNA文库电泳图、酶切图和序列比对图)以及COA文件
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