2×GenRec 单段重组试剂盒
产品特色

    产品概述:

    2×GenRec 单段重组试剂盒是一款简单、快速、高效的单片段DNA定向克隆产品,本试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点。将载体在克隆位点进行线性化,并在插入片段PCR引物5'端引入线性化克隆载体末端序列,使得插入片段PCR产物5'和3'最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列(20 bp~40 bp)。将这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化克隆载体按一定比例混合,在重组酶的催化下,仅需反应15-30 min即可进行转化,完成定向克隆。克隆阳性率可达90%以上。试剂盒中预混了重组酶和重组反应所需缓冲液,并添加了特殊成分,可显著提高重组克隆效率。

    产品组成:

    2×GenRec Master Mix

    产品特点:

  • 简单高效的定向无缝克隆
  • 灵活的序列设计,无需考虑酶切位点
  • 无需PCR纯化步骤
产品说明

    使用说明:

    1、反应体系

    冰上配制如下反应体系。

    2×GenRec Master Mix         10 μL

    线性化克隆载体                                   A ng

    插入片度(PCR扩增产物                   B ng

    ddH2O   Up to 20μL

    注:如果不慎将液体粘在管壁,可通过短暂离心使其沉入管底。

    GenRec Master Mix重组反应体系最适DNA使用量为线性化片段0.03pmol。该摩尔数对应的DNA质量可由以下公式计算获得:

    片段添加量(ng= 0.02×片段碱基对数(bp)(对应的片段浓度为0.03 pmol

    2、重组反应


    1. 在冰上解冻2×GenRec Master Mix,颠倒混匀。
    2. 在无菌管中加入载体和片段(按上述要求),用无菌水补足到10μL,最后加入10 μL 2×GenRec Master Mix,用移液器轻轻吸打混匀避免气泡产生。
    3. 50℃恒温反应15-30min,在冰上放置3-5min


    3、转化


    1. 取化学转化感受态细胞于冰上解冻。
    2. 取上述反应液10 μL加入到感受态细胞中充分混匀。冰浴10min。
    3. 将离心管置于42℃水浴锅中热激90s,然后迅速放回冰上,使细胞冷却2~3min。
    4. 向离心管中加入已预热的无菌LB(或SOC)培养液600μL,37℃恒温振荡培养45~60min。
    5. 短暂离心弃上清,吸取100 μL的新鲜LB培养基重新悬浮,将菌液均匀涂布在含有适当抗生素的平板上。将平板倒置,于37℃过夜培养。


    4、 克隆鉴定

    菌落PCR。用无菌的枪头或牙签将单个菌落挑至20~50μL LB 培养基中混匀,直接取1μL作为PCR模板,使用2×Taq DNA Polymerase Master进性菌落PCR实验。

    注意事项:

  • 为达到最优的重组效果,请保证体系中PCR片段和载体的质量,建议DNA样品A260/280>1.8,浓度>40ng/ul。
  • 当得到的PCR产物条带单一时,可无需纯化,产物可直接用于重组。
  • EDTA等金属离子螯合剂对该产品有抑制作用,必须保证反应体系中不含该类螯合剂。
产品内容
    产品名称 目录号 规格 价格
    2×GenRec 单段重组试剂盒

    CL07010

    10次 ¥375元

    CL07020

    20次 ¥625元

    CL07050

    50次 ¥1000元

    说明书
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