• 1.Trimer引物——可满足对蛋白、抗体文库中特定位点氨基酸的多样性和偏好性需求
  • 可在突变位点处避免产生冗余突变和终止密码子
  • 根据氨基酸碱基密码进行设计，密码子与氨基酸一一对应
  • Trimer混合元件单元设计引物，可精准控制突变位点氨基酸比例
• 示例1
• 5^'GCAACTTATTACTGTCAGCAA(X)5-8CYGWTCACGTTCGGACAGGG3^'
• X Trimers=Y(50%)/S (10%)/G(10%)/A(5%)/F(5%)/W(5%)/H(5%)/P(5%)/V(5%)
• 示例2
• 5^'YCAVCTTATTACTATCAGCAA(X)3-6CYGWTCACGTVSGGACAAAG3^'
• X Trimers=A(30%)/S (20%)/W(15%)/Y(10%)/F(5%)/G(5%)/H(5%)/V(5%)/P(5%)

表1. Trimer与氨基酸对照表

• 2.IUBcode简并引物
• 通过混合2-4种碱基，核苷代码由单一的A、T、C、G拓展到R、Y、......N等11种混合核苷代码（IUB code，见表2）。使用IUB code构建不同的密码子组合，可以在突变位点形成固定氨基酸的组合。

表2. UBcode密码对照表

• 3.NNK简并引物
• NNK简并密码子包含了32种密码子组合，覆盖了所有20种氨酸残基，是构建文库常用的简并密码子。
• 示例
• 5^'GGCCCTAACGGATAACCG(NNK)6GCCAATTCATGCACCTTACG3^'
• N=A/C/G/T， K =G/T

• 1-5μg线性DNA文库或5-10μg质粒DNA文库的冻干样品
• 1支含有混合文库的穿刺菌/甘油菌
• 测序峰图（abi文件电子版）
• COA文件（电子版）
• 基因序列比对文件（电子版）